正確使用和維護Inertsil色譜柱至關(guān)重要,稍有疏忽就可能導(dǎo)致柱效降低、壽命縮短甚至損壞。在色譜操作中,需留意以下事項,以確保色譜柱的維護工作。
1、要避免急劇的壓力和溫度變化,以及任何機械振動。溫度忽然變化或色譜柱從高處掉落都可能影響柱內(nèi)填料的狀況;而壓力忽然增高或減低也會影響柱內(nèi)填充物。因此在調(diào)節(jié)流速時需緩慢進行,在閥門進樣時也不能轉(zhuǎn)動得太快。
2、需要逐步調(diào)整溶劑的成分,特別是在反相色譜中,并不宜直接從有機溶劑轉(zhuǎn)變?yōu)槿軇?,反之亦然?/p>
3、一般情況下,色譜柱不宜進行反向洗脫。只有在生產(chǎn)商明確指示柱子可以進行反向洗脫才可這樣做,以去除殘留在柱頭的雜質(zhì)。若沒有明確說明,反向洗脫可能會迅速降低柱效。
4、選擇合適的流動相至關(guān)重要,尤其是要考慮pH值,以確保固定相不會受到破壞。有時在進樣器之前連接一個預(yù)柱可以幫助保護分析柱,特別是當(dāng)分析柱是鍵合硅膠時。預(yù)柱使用硅膠,這樣流動相在進入分析柱之前就會被硅膠“飽和”,有效地防止分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
5、避免直接將復(fù)雜基質(zhì)的樣品,尤其是生物樣品注入柱內(nèi),應(yīng)對樣品進行預(yù)處理或在進樣器和色譜柱之間加裝一根保護柱。保護柱一般是填充有相同固定相的短柱,需要定期更換。
6、經(jīng)常使用強溶劑清洗色譜柱,以去除柱內(nèi)保留的雜質(zhì)。在清洗過程中,替換流動相應(yīng)當(dāng)逐漸過渡到與原流動相混溶的溶劑,每種流動相的量應(yīng)約為柱體積的20倍,即一般情況下需50~75毫升。
7、在儲存色譜柱時,應(yīng)該確保柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,同時緊固柱接頭,以防止溶劑揮發(fā)導(dǎo)致干燥。嚴(yán)禁讓緩沖溶液在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。
8、在使用色譜柱時,若遇到壓力升高的情況,一種可能是濾芯被堵塞,可考慮更換或清洗濾芯;另一種可能是大分子物質(zhì)進入柱內(nèi),導(dǎo)致柱頭受污染;若柱效降低或色譜峰形狀失真,可能是柱頭發(fā)生塌陷,引起死體積增加。
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